結合逆流層析與反微胞技術萃取及濃縮蛋白質分子

Abstract

本實驗選擇含有陰離子型界面活性劑sodium bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate (AOT) 的正己烷溶液為反微胞有機相，以有機相為靜相，水溶液相為動相，並以高速逆流層析儀(high speed counter-current chromatograph)當作一高效率之萃取裝置。當含有生物分子的水溶液流經管柱中的靜相時，蛋白質分子會被萃取至反微胞相中而滯留在分離管柱中；待正向萃取完成後，注入高pH值的鹼性溶液，藉由動相的帶動改變反微胞相的環境，使蛋白質分子轉移至此一水溶液中，完成反向萃取，並在過程中達成濃縮蛋白質分子。在對單一成分蛋白質cytochrome c之回收效率探討中，我們使用50 mM AOT萃取100 mg/l cytochrome c可以達到95.4％之回收率；而我們也使用未事先經過平衡之動靜相溶劑系統針對20 mg/l cytochrome c進行萃取，結果發現：在同樣以90 mM AOT為靜相之條件下，此系統所得之回收率(78.7％)高於採用經過平衡之溶劑系統所得到之回收率(62％)；最後我們嘗試針對酵素混合溶液，在逆流層析儀中進行選擇性的分離萃取。