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具肝保護功效性的圓魚肝臟萃取物之研發
(2004)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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國立交通大學生物科技學系
基質金屬蛋脢(MMPs)與金屬蛋白脢組織抑制因子(TIMPs)的表現調節與活化之交互關聯性及其在左心室重塑病程中的病理機制
(2006)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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國立交通大學生物科技學系(所)
心肌梗塞（myocardial infarction; MI）後發生的左心室重塑（left ventricular remodeling; LV remodeling）病程將導致患者心臟衰竭（heart failure; HF），甚至死亡。近二十年來，研究者已知細胞間基質（extracellular matrix; ECM）的失序是LV remodeling 病理機轉中的一個重要因素。基質金屬蛋白.（Matrix metalloproteinases; MMPs）是一群可降解組織中ECM 的蛋白質分解酵素，而不正常ECM 的降解與許多疾病的病理生理狀況有關。此外，組織中存在一類內源性金屬蛋白.組織抑制因子（ tissue inhibitors of metalloproteinases; TIMPs），它們精密調控著MMPs 的活性。因此，一旦體內發生MMP 與TIMP 基因表現或酵素活化水平上的調控失衡，將導致組織中MMP 活性異常提昇，就會誘發MI 傷害、HF 及擴張性心肌病（dilated cardiomyopathy; DCM）等等。儘管影響ECM 的正常代謝與疾病發生關係密切，但是MMPs、TIMPs 及其調節因子間的交互作用與在MI 或HF 病程的發生機制至今仍存在許多疑團，等待探索。在本計畫中，我們針對解決上述疑團，擬訂三個研究策略。研究策略一，我們將構築MMP/TIMP .promoter activity 的載體（ vector ），包括MMP-2/TIMP-2 與 MMP-9/TIMP-4 兩個載體，其分別將在MMP 與TIMP 基因起動子（promoter，約1.5 ~ 2 kb 長度）後端聯接報導基因（reportor）綠色螢光蛋白（green fluorescent protein; GFP）與紅色螢光蛋白（red fluorescent protein; dsRed）。所建構的載體將利用DNA-微脂粒（liposome）方法傳送入培養的心臟成纖維母細胞（myofibroblast）株H9c2 或由大鼠初代培養的心臟成纖維母細胞中，用於探討在TGF-β、TNF-α、angiotensin peptides 或 hypoxia 處理下，細胞中MMP 與TIMP 基因被調節表現的交互相關性，而這些都是已知會影響細胞啟動與ECM 代謝有關的訊號傳遞途徑（signaling pathways）的因子。研究策略二，建構一ECM、MMPs、TIMPs、與其相關基因之寡核.酸（oligonucleotide，65 ~ 70 mer）的基因晶片CardioMP Gene Chip，此晶片將用於經TGF-β、TNF-α、angiotensin peptides 或hypoxia 處理之細胞（研究策略一），及MI 或衰竭心臟組織中ECM、MMPs、 TIMPs 及其相關基因表現的全貌與態樣（研究策略三）。CardioMP Gene Chip 將採用Cy3 與Cy5 .螢光競爭性雜交（competitive hybridization）的玻璃晶片系統行之。研究策略三，我們將建立冠狀動脈結紮（coronary artery ligation; CAL）與注射adriamycin 方法誘發大鼠MI 或HF 的動物模式，此將提供我們探討在LV remodeling 病程中心臟ECM、 MMPs、TIMPs 及其相關因子的交互影響網絡。大鼠在接受CAL 手術或密集注射 adriamycin 後的不同時間點，我們將利用zymography 方法測定大鼠血漿中與心臟組織中各種MMPs 與TIMPs 活性，也將利用CardioMP Gene Chip 分析其心臟組織中各基因表
山藥、石蓮花及垂盆草萃出物抑制人類肝癌細胞生長效應之探討
(2002)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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交通大學生物科技研究所
建構粒腺體DNA晶片應用於食品與飼料成份中動物種源的檢測與鑑別
(2005)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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國立交通大學生物科技學系(所)
食物與飼料組成份中肉源種類鑑別對於防疫工作的進行非常重要，同時對某些地區因保障動物權或因宗教信仰禁止食用部分動物，也得依賴肉源鑑別技術來協助法令的執行。近年來，由於消費者擔心由狂牛症疫區所販售製品中混雜有牛肉，此更使得食物與飼料中肉源種類鑑別工作更顯重要。根據過去十年來的研究成果已知，以DNA 為檢驗標的物（target）較蛋白質為佳，此乃DNA 即使經過高度嚴苛加工程序（例如高溫處理），仍能保持其穩定性，且在一動物個體中任一組織的DNA 組成皆相同，因此以DNA 為基礎的動物種源檢測原理為測定各種動物細胞中存在的特定且專一的序列。本計畫中，我們將建構一粒腺體DNA 晶片（mtDNA Chip）以使用於食品與飼料成份中動物種源的檢測與鑑別，研究主旨為利用最少的引子對可同時在食品或動物飼料中檢測到多種動物 mtDNA 的方法。mtDNA Chip 的建構策略如下，我們將由至少30 種家畜、家禽及其他動物mtDNA 中的cytochrome b 基因序列比對結果中找尋適當位置設計3-5 個泛用引子對（Universal Primers），這些引子對可由標的物中經PCR 擴增得到一約100 bp 的短鏈 DNA 片段（short PCR fragment, SPF），為區別不同動物種別，在上述SPR 的引子對中間序列可以設計出鑑別各個動物種別的獨特探針（Specific Probes）序列，這些探針具有 50 bp 並在5』端以氨基(5』-aminolinker C6)修飾之，探針群將重複被點置於玻璃晶片上，標的DNA在經PCR擴增製作同時也標定Cy3-dUTP 或Cy5-dUTP 螢光物，此再與mtDNA Chip 進行雜交，根據雜交所得的螢光訊號結果可知檢測物中所含的動物種別。利用多重引子對之PCR 擴增作用與晶片螢光雜交技術，我們所建立的mtDNA Chip 將被應用於食品或飼料中混合肉源的檢測與鑑別測驗。我們mtDNA Chip 上的特定探針數可持續增加，未來或可成為一種生物多樣性晶片(Biodiversity-Chip)。
應用DNA晶片於豬隻生長潛能早期偵測之技術研發
(2001)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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交通大學生物科技研究所
應用DNA晶片於豬隻生長潛能早期偵測之技術研發
(2001)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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國立交通大學生物科技學系(所)
成豬模式心房顫動之電生理、數學、訊息傳遞及基因調控機轉---臨床治療策略之指針---心房顫動病程機轉中組織與細胞基質蛋白相關基因及其調控因子的探討(I)
(2003)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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國立交通大學生物科技學系
成豬模式心房顫動之電生理、數學、訊息傳遞及基因調控機轉---臨床治療策略之指針---心房顫動病程機轉中組織與細胞基質蛋白相關基因及其調控因子的探討(II)
(2004)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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國立交通大學生物科技學系
探討中草藥萃出物處理對人類肝癌細胞之效應並建立中草藥抗癌功效性之表現基因分子圖譜
(2003)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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國立交通大學生物科技學系
食品與飼料組成分中動物種源鑑別DNA快速檢驗法之建立及其應用
(2004)
林志生
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LIN CHICH SHENG
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國立交通大學生物科技學系
食物與飼料組成份中肉源種類鑑別對於防疫工作的進行非常重要，同時對某些地區因保障動物權或因宗教信仰禁止食用部分動物，也得依賴肉源鑑別技術來協助法令的執行。近年來，由於消費者擔心由狂牛症疫區所販售製品中混雜有牛肉，此更使食物與飼料中肉源種類鑑別工作更顯重要。根據過去十年來的研究成果已知，以DNA為檢驗標的物（target）較蛋白質為佳，此乃DNA即使經過高度嚴苛加工程序（例如高溫處理），仍能保持其穩定性，且在一動物個體中任一組織的DNA組成皆相同。以DNA為基礎的動物種源檢測原理為測定各種動物細胞中存在的特定且專一的序列。本計畫中，我們將結合生物資訊與分子檢測技術研發可用於鑑別與定量動物種源的方法，我們預期進行所謂「計算選取粒線體DNA放大指紋法（Computer-Aided Selection mitochondrial DNA Amplification Fingerprinting）」（第一年）與 DNA晶片（第二年）兩項研究工作，這兩項策略的檢測標的DNA皆為mtDNA，此乃細胞中mtDNA具有分子數多、物種間序列差異性大與容易萃取及檢測的特性。在Selection mitochondrial DNA Amplification Fingerprinting研究策略中，各畜禽的mtDNA D-loop序列將被用來作為種源專一性引子（primer）設計的依據，這些引子會被組合成引子組（primer set）用於在一次偵測反應中，此為利用最少的引子數可同時在食品或飼料中檢測多種物種的方法。在本方法中，標的mtDNA D-loop片段在PCR反應擴增過程中加入螢光標誌物，並以毛細管電泳技術分析之。在DNA晶片研究策略中，我們預期由至少20種動物的mtDNA D-loop與cytochrome b序列之高度保留區及高度差異區中，設計出可用於分示這些動物種源20-25 bp的oligonucleotide約100段。這些oligonucleotides探針序列將被點置於玻璃晶片上，並與經螢光物質Cy3或Cy5標誌之標的DNA進行雜交，DNA晶片雜交結果所呈現的態樣（pattern）便可作為標的物中含有的動物種源檢測。運用我們所將建立的兩種方法，預期可由一含有混合肉的食物或飼料中檢驗出多重特定的動物物種組成，且計畫目標使之成為可定量之技術，而期望的定量底限為1%以下。