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P42在肥厚性心肌病之生化角色(III)
(2000)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系
SARS病患臨床超快速檢測
(2003)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系
以無性生殖單一小鼠研究其對癌細胞之反應(II)
(2000)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系
充實研究設備提升生物科技研究能量---交通大學生物科技學院研究設備提昇計畫
(2009)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系（所）
利用噬菌體重組抗體檢測牛乳品質
(2001)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系
利用噬菌體重組抗體檢測牛乳品質(I)
(2002)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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交通大學生物科技研究所
利用噬菌體重組抗體檢測牛乳品質(II)
(2003)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系
國內鮮牛乳Beta-lactoglobulin之大量損失對於生化及生理功能之影響
(2004)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系
β-lactoglobulin (LG) 是牛乳中主要蛋白之一，佔全部蛋白的10-15%。實際上，在人體中LG 可在腸胃道被吸收。雖然LG 的生化特性已被研究地相當透徹，但其生理功能目前仍在部分瞭解的階段。最近（2000-2003），LG 被發現有降低膽固醇及防癌的功效。過去2 年間，我們的實驗結果發現在台灣市售的鮮奶中，LG 的含量幾乎完全地消失，推測有2 種可能性，第一、在加工的殺菌過程中，生乳被過度加熱；第二、市售鮮乳中摻雜有還原乳。為了辨識奶粉與鮮奶中LG 的差異性，我們發展出可以區分生乳與還原乳的專一性單株抗體，利用抗體晶片的技術，我們可以在5 分鐘內判別鮮乳中是否有添加奶粉。目前我們正深入研究其高專一性辨別能力的作用機制，及製造過程中LG 在生化特性及結構上的改變。基本上，主要是因素為LG 與牛乳中其他的蛋白質產生了相互結合的現象，如lactoalbumin、免疫球蛋白、albumin 以及casein 等。由於LG 也會藉由自身共價鍵結的方式，形成多單元結構，而在台灣80%以上的市售鮮乳中LG 結構上完全改變，目前也尚無法瞭解其改變是否會影響LG 生理角色的影響。值得注意的是牛奶已逐漸成為國人飲食中，胺基酸的主要攝取來源之一，因此本研究也就益顯重要。本研究兩年中主要研究目標為 1. 在實驗室中利用不同溫度及時間加熱處理LG，並決定其結合之形成及利用生化方法分析LG 與何種蛋白結合。 2. 以小鼠為動物模式比較國內市售牛乳加工前 (LG 未結合其他蛋白) 及加工後 (LG 結合其他蛋白) 之LG 在血中之吸收量。完成後再與美國市售鮮乳比較，並同時進行兩種鮮乳對小鼠成長速率之影響分析。 3. 比較加熱 (LG 破壞) 及未加熱 (LG 未破壞)之牛乳對小鼠之過敏反應，以血液短暫期 (transient) 之Ig E 為指標 (因為加熱後會擴大cross-linking 之大分子，胃腸無法吸收)。 4. 決定LG 在生乳中之抗氧化能力並定出其比例。同時進行調查市售鮮乳在LG 損壞下之總抗氧化力。 5. 宣導國內乳品加工方式之改善。
抗發炎分子haptoglobin在生理上之角色
(2006)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系(所)
乳房炎及心血管疾病之致病機制與發炎反應有相關，而發炎反應會引發急性蛋白分泌。Haptoglobin (Hp)為急性發炎蛋白之ㄧ，是血液中與游離之hemoglobin 結合以降低氧化所造成之損傷。在人類中生理上共分成三種型式：Hp 1-1, Hp 2-1 及Hp 2-2。不同表現型於各種疾病發生及一些發炎病症之預後情形扮演極具影響力之必要角色。在功能上除與hemoglobin 結合外，尚有抗氧化及調節免疫等功能，但其生理功能僅部分被確認。在牛及其他動物中之Hp 僅有一種型式，牛Hp 類似人類Hp 2-2 之表現型。先前報告中牛之乳房被細菌感染後會引發乳房上皮細胞大量表現Hp，而此Hp 會存在於牛乳中可利用檢測乳房炎之重要指標，然而發炎反應所引起Hp 濃度上升之機制需深入探討。於先導試驗中，在心血管病變區首次發現有Hp 之堆積，並且更進一步證明在病變區域之Hp 為泡沫細胞所表現，而在細胞實驗中亦同時證明在氧化之LDL 能刺激巨噬細胞表現Hp 及發現平滑肌亦會被氧化之LDL 刺激分泌Hp 蛋白，並且同時具有抑制其增生之功能。我們認為Hp 於造成冠狀動脈硬化之過程扮演極重要之角色。本計劃將具體探討於發炎反應中Hp 之調控機制，並以乳房炎及心血管病變為研究模式進一步研究Hp 於致病機制之影響。因此本計畫兩年目標如下： 1. 探討Hp 與發炎反應之關係。(第一年及第二年) 2. 研究Hp 與乳牛乳房炎之關係。(第一年及第二年) 3. 利用Hp 之單株抗體製作快速檢測試劑檢測牛之乳房炎。(第一年及第二年) 4. 利用迷你豬之動物模式研究Haptoglobuin 與動脈硬化之關係。(第一年及第二年)
抗發炎分子Haptoglobin在生理上之角色
(2007)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系(所)
乳房炎及心血管疾病之致病機制與發炎反應有相關，而發炎反應會引發急性蛋白分泌。Haptoglobin (Hp)為急性發炎蛋白之ㄧ，是血液中與游離之hemoglobin 結合以降低氧化所造成之損傷。在人類中生理上共分成三種型式：Hp 1-1, Hp 2-1 及Hp 2-2。不同表現型於各種疾病發生及一些發炎病症之預後情形扮演極具影響力之必要角色。在功能上除與hemoglobin 結合外，尚有抗氧化及調節免疫等功能，但其生理功能僅部分被確認。在牛及其他動物中之Hp 僅有一種型式，牛Hp 類似人類Hp 2-2 之表現型。先前報告中牛之乳房被細菌感染後會引發乳房上皮細胞大量表現Hp，而此Hp 會存在於牛乳中可利用檢測乳房炎之重要指標，然而發炎反應所引起Hp 濃度上升之機制需深入探討。於先導試驗中，在心血管病變區首次發現有Hp 之堆積，並且更進一步證明在病變區域之Hp 為泡沫細胞所表現，而在細胞實驗中亦同時證明在氧化之LDL 能刺激巨噬細胞表現Hp 及發現平滑肌亦會被氧化之LDL 刺激分泌Hp 蛋白，並且同時具有抑制其增生之功能。我們認為Hp 於造成冠狀動脈硬化之過程扮演極重要之角色。本計劃將具體探討於發炎反應中Hp 之調控機制，並以乳房炎及心血管病變為研究模式進一步研究Hp 於致病機制之影響。因此本計畫兩年目標如下： 1. 探討Hp 與發炎反應之關係。(第一年及第二年) 2. 研究Hp 與乳牛乳房炎之關係。(第一年及第二年) 3. 利用Hp 之單株抗體製作快速檢測試劑檢測牛之乳房炎。(第一年及第二年) 4. 利用迷你豬之動物模式研究Haptoglobuin 與動脈硬化之關係。(第一年及第二年)
牛乳中Beta-Lactoglobulin之生理功能(I)
(2005)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系(所)
β -Lactoglobulin (LG)是牛乳主要蛋白之一，含量約10％，分子量約18.5kDa，LG 為lipocalin 成員之一，二級結構上由9 個β-sheet 及1 個 α-helix 所組成。中心為疏水性結構 (calyx)，可結合Vit A、Vit D、脂肪酸及固醇類。不似α-lactalbumin 可耐熱， LG 是牛乳中主要熱敏感蛋白，在加熱70-80 ℃之間其二級結構開始改變。過去三年半研究中，我們定義出LG 變性之溫度及時間，可提供業者乳品加工之依據 (Chen et al, 2005, JDS) (1)。同時定位出LG 加熱變性之區域，此區域於加熱80℃以上即改變結構，使其喪失結合疏水性分子之功能(Song et al, 2004, JBC) (2)。此外我們已發表只可辨識還原乳而不辨識生乳之單株抗體 (Chen et al, 2004, JDS) (3)。反之，製作只辨識native LG 之單株抗體相當重要，將其用於偵測加工後鮮乳內尚未變性之LG。然而LG 生理上功能至今尚未清楚，唯獨在In vivo 方面證明有降低膽固醇之功能，但加熱後LG 對於降低膽固醇之影響尚未被證明出，本計畫欲證明LG 降低膽固醇之機制，更深入探討LG 結構改變是否喪失降低膽固醇之功能。近來我們證明LG 具有刺激hybridoma B cell 增生，將利用LG 調控細胞生長或可廣泛應用於藥物、營養及食品工業。因此本計畫兩年目標如下：主要目標： 1. 利用單株抗體為標定物分析LG 熱敏感區域及與其生理功能之相關性 (第一年)。 2. 製作只專一性辨認native LG 之單株抗體，並用於偵測加工後牛乳中native LG 之含量。(第一年)。 3. 探討加熱前LG 與加熱後LG 對降低膽固醇之影響(第一年及第二年)。 4. 研究LG 刺激hybridoma B cell 增生之機制，並純化LG 之receptor 及與receptor 結合之區域。(第一年及第二年)。過去三年半我們非常努力，由於篩選抗體、生理實驗及純化receptor 所需之時間較長，我們提出兩年之計畫，誠懇希望獲得支持。
牛乳中β-lactoglobulin之生理功能(II)
(2006)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系(所)
牛乳中β-lactoglobulin與維生素D之結合能力
(2008)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系(所)
β-Lactoglobulin (LG)是牛乳主要蛋白之一，含量約10％，分子量約18.5kDa，二級結構上由9 個β-sheet 及1 個α-helix 所組成。中心為疏水性結構(calyx)，可結合維生素A和D、棕梠酸(palmitic acid)等疏水性分子。LG 是牛乳中主要熱敏感蛋白，在加熱70-80°C之間其二級結構開始改變。過去五年研究中，我們定義出LG 變性之溫度及時間，可提供業者乳品加工之依據(Chen et al, JDS, 2005) (1)。並定位出LG 加熱變性之區域，使其喪失結合疏水性分子之功能(Song et al, JBC, 2004) (2)。此外我們發現只可辨識還原乳而不辨識生乳之單株抗體(Chen et al, JDS, 2004 and 2006) (3-4)。反之，也製作出只辨識nativeLG 之單株抗體，將其用於偵測加工後鮮乳內尚未變性之LG (Liu et al, JDS, 2007) (5)。並發現LG能刺激hybridoma cell增生，經加熱後即完全喪失上述功能。並鑑定LG 之receptor為membrane Ig M，此為一重大發現。利用同步輻射光束繞射LG與維生素D三度空間複合體(complex)結晶，確切得知LG上第二個維生素D結合區所在區域(由本實驗室首次發現) (Yang et al, Proteins, 2007) (6)。當人們缺乏維生素D時，產生許多疾病如骨質疏鬆症、自體免疫失調(多發性硬化症、腦脊髓炎)。然而LG 生理上功能至今尚未清楚，唯獨在in vivo研究，LG對於胃酸抗性極佳，其通過胃仍保持完整結構。於母親喝牛乳後可在母乳中偵測到完整LG實驗驗證。因此LG具有攜帶疏水性分子通過腸胃道，增加疏水性分子吸收之能力。本計畫將利用定點突變進行系統化分析LG第二維生素結合區上重要參與結合之胺基酸，進一步利用Docking程式模擬出維生素D結合模式，另一方面利用動物實驗研究LG增加維生素D吸收之相關機制，以利於未來將LG應用於維生素D及其類似物輸送與吸收。本計畫之主要目標如下： 1. 利用專一性單株抗體分析LG 熱敏感區域及其與生理功能之相關性 (第一年)。 2. 利用大腸桿菌表現LG重組蛋白及進行單一胺基酸取代之定點突變 (第一年及第二年)。 3. 測定LG及突變型重組蛋白與維生素D之結合能力，分析LG第二結合區(Secondary binding site)上重要參與結合之胺基酸 (第一年及第二年)。 4. 利用Docking computer simulation程式比較各種疏水性分子與LG結合情形 (第一年及第二年)。 5. 利用分子模擬計算各突變型LG之維生素D結合能力，以設計增加維生素D結合能力之LG重組蛋白 (第一年及第二年)。 6. 測定LG增加維生素D吸收之效能(動物實驗)，並分析LG增加維生素D吸收之相關機制 (第一年及第二年)。過去五年(2002~2006)我們非常努力，由於篩選抗體、生理實驗及定點突變表現及純化LG重組蛋白所需之時間較長，我們提出兩年之計畫，誠懇希望獲得支持。
牛乳中β-lactoglobulin與維生素D之結合能力
(2009)
毛仁淡
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Mao Simon J.T.
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國立交通大學生物科技學系(所)
β-Lactoglobulin (LG)是牛乳主要蛋白之一，含量約10％，分子量約18.5kDa，二級結構上由9 個β-sheet 及1 個α-helix 所組成。中心為疏水性結構(calyx)，可結合維生素A和D、棕梠酸(palmitic acid)等疏水性分子。LG 是牛乳中主要熱敏感蛋白，在加熱70-80°C之間其二級結構開始改變。過去五年研究中，我們定義出LG 變性之溫度及時間，可提供業者乳品加工之依據(Chen et al, JDS, 2005) (1)。並定位出LG 加熱變性之區域，使其喪失結合疏水性分子之功能(Song et al, JBC, 2004) (2)。此外我們發現只可辨識還原乳而不辨識生乳之單株抗體(Chen et al, JDS, 2004 and 2006) (3-4)。反之，也製作出只辨識nativeLG 之單株抗體，將其用於偵測加工後鮮乳內尚未變性之LG (Liu et al, JDS, 2007) (5)。並發現LG能刺激hybridoma cell增生，經加熱後即完全喪失上述功能。並鑑定LG 之receptor為membrane Ig M，此為一重大發現。利用同步輻射光束繞射LG與維生素D三度空間複合體(complex)結晶，確切得知LG上第二個維生素D結合區所在區域(由本實驗室首次發現) (Yang et al, Proteins, 2007) (6)。當人們缺乏維生素D時，產生許多疾病如骨質疏鬆症、自體免疫失調(多發性硬化症、腦脊髓炎)。然而LG 生理上功能至今尚未清楚，唯獨在in vivo研究，LG對於胃酸抗性極佳，其通過胃仍保持完整結構。於母親喝牛乳後可在母乳中偵測到完整LG實驗驗證。因此LG具有攜帶疏水性分子通過腸胃道，增加疏水性分子吸收之能力。本計畫將利用定點突變進行系統化分析LG第二維生素結合區上重要參與結合之胺基酸，進一步利用Docking程式模擬出維生素D結合模式，另一方面利用動物實驗研究LG增加維生素D吸收之相關機制，以利於未來將LG應用於維生素D及其類似物輸送與吸收。本計畫之主要目標如下： 1. 利用專一性單株抗體分析LG 熱敏感區域及其與生理功能之相關性 (第一年)。 2. 利用大腸桿菌表現LG重組蛋白及進行單一胺基酸取代之定點突變 (第一年及第二年)。 3. 測定LG及突變型重組蛋白與維生素D之結合能力，分析LG第二結合區(Secondary binding site)上重要參與結合之胺基酸 (第一年及第二年)。 4. 利用Docking computer simulation程式比較各種疏水性分子與LG結合情形 (第一年及第二年)。 5. 利用分子模擬計算各突變型LG之維生素D結合能力，以設計增加維生素D結合能力之LG重組蛋白 (第一年及第二年)。 6. 測定LG增加維生素D吸收之效能(動物實驗)，並分析LG增加維生素D吸收之相關機制 (第一年及第二年)。過去五年(2002~2006)我們非常努力，由於篩選抗體、生理實驗及定點突變表現及純化LG重組蛋白所需之時間較長，我們提出兩年之計畫，誠懇希望獲得支持。