Browsing by Author "PENG HWEI-LING"

Now showing 1 - 12 of 12

克雷白氏肺炎桿菌CG43反應膜外壓力的雙分子系統CpxAR 的功能性探討
(2016)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系（所）
克雷白氏肺炎桿菌CG43反應膜外壓力的雙分子系統CpxAR 的功能性探討
(2015)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系（所）
克雷白氏肺炎桿菌之活體表現蛋白YjcC 在過氧化逆境中所扮演的角色
(2009)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系(所)
克雷白氏肺炎桿菌之活體表現蛋白YjcC在過氧化逆境中所扮演的角色
(2008)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系(所)
克雷白氏肺炎桿菌之活體表現蛋白YjcC在過氧化逆境中所扮演的角色
(2010)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系（所）
克雷白氏肺炎桿菌第一型纖毛和第三型纖毛交互表現的調控
(2009)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系（所）
細菌纖毛藉由其黏附特異性與特定的細胞結合，為其造成感染的關鍵步驟。已知，第一型或第三型纖毛是克雷白氏肺炎桿菌臨床分離株表現的主要黏附因子。我們在執行94IDP11計劃的實驗發現：在克雷白氏肺炎桿菌株NTUH K2044或 CG43中，第三型纖毛的主要結構蛋白mrkA基因的缺損，明顯增加了第一型纖毛FimA結構蛋白的表現量；而大量表現FimB重組脢，提升第一型纖毛的表現，卻明顯降低了MrkA蛋白的生成；另外，莢膜多醣生成的主要調控蛋白RcsB的基因缺損，降低莢膜多醣的生成，相對的提升第一型纖毛的活性，而MrkA蛋白的表現量卻減少。這些結果顯示第一型纖毛和第三型纖毛的對立表現（counter-expression），也暗示負責著纖毛和莢膜多醣表現的調控系統可能有交互作用。我們在此提出計劃分離鑑定負責此對立表現的調控分子，並探討其對立表現的調控機制。特定的目標如下：目標一、建構註解為調控基因的特定基因缺損株，探討其對此二纖毛對立表現的影響：這些特定的調控基因包括位於第一型纖毛基因組末端的fimK、位於第三型纖毛基因組前端的phgS、phgM及末端的KP4551、KP4552、KP4554 (參考NTUH K2044的基因體序列註解：http://genome.nhri.org.tw/kp/index.php )。其中，我們將選殖、表現對纖毛活性有明顯缺損影響的調控基因，並探討其對此二纖毛對立表現的調控機制。目標二、建構跳躍子突變基因庫（transposon-insertion mutant library），篩選可能的調控基因：以mrkA基因缺損株、rcsB基因缺損株為跳躍子接受株時，將以酵母菌凝聚測試（yeast agglutination assay）篩選活性降低的突變株；而以帶有LacZ作為第一、三型纖毛表現的報告系統的菌株為對象時，則以X-Gal培養盤篩選顏色變化的突變株。定序分析這些有明顯變化的突變點後，我們將選殖這些有可能的基因並構築此基因缺損株，再以回補試驗（complementation assay）確認其對第一或第三型纖毛表現的影響，我們也將進一步探討其機制與對莢膜多醣表現的調控交互作用。目標三、探討外膜逆境反應（Envelope stress responses）的調控在此二纖毛對立表現中可能扮演的角色：mrkA基因缺損株可能因為MrkB、MrkC、MrkD、MrkF蛋白在膜間隙累積而引起外膜逆境，第一型纖毛卻因mrkA基因缺損而表現；另一方面，莢膜多醣的生成只影響第一型纖毛的表現，這些結果暗示外膜環境的調控對第一型、三型纖毛的表現有選擇性的影響。因此，我們將定量分析mrkA基因缺損株中與調控外膜逆境反應相關基因的表現，進一步探討外膜逆境反應在此二纖毛對立表現中可能扮演的角色。
全基因體化分析克雷白氏肺炎桿菌纖毛基因組的表現(II)
(2006)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系(所)
全基因體化分析克雷白氏肺炎桿菌纖毛基因組的表現(III)
(2007)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系(所)
探討RcsB在克雷白氏肺炎桿菌CG43中調控抗酸逆境的反應
(2011)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系（所）
在克雷白氏肺炎桿菌具有厚重莢膜的臨床分離株CG43中，我們發現rcsB基因缺損不僅降低其莢膜生成量也降低了此菌在酸逆境（pH 3-M9培養基）的存活率，而此缺失可被轉殖入一表現rcsB基因的質體所彌補，此暗示RcsB扮演調控酸性逆境反應的角色。經由已定序的CG43基因體中搜尋同源序列，我們發現六個可能被RcsB調控的抗酸基因：其中，yfdX、hdeDB以及hdeB1基因座落於可能的適酸小島(acid fitness island)；此外，以二維蛋白質電泳比較分析以酸處理（pH 4.4-LB一小時）的CG43S3與CG43S3ΔrcsB蛋白體，分離出一個因rcsB缺損而不表現的蛋白點，經串聯質譜分析後鑑定為YfdX蛋白。為了更深入探討RcsB基因在調控抗酸逆境反應的角色，近一年的工作如下:1. 已建構ΔhdeB、ΔhdeD、ΔhdeB1、ΔhdeDB、ΔhdeBΔhdeB1、ΔhdeDBΔhdeB1、ΔhdeDΔyfdX、ΔhdeDBΔyfdX、ΔhdeDBΔhdeDΔhdeB1、ΔrcsBΔyfdX和ΔkvhAΔyfdX基因缺損株。2. 經由酸逆境存活率分析確認AFI基因均參與抗酸反應，而各基因缺損影響為ΔhdeB1＞ΔhdeD＞Δ yfdX＞ΔhdeB；ΔrcsB＞ΔyfdX＞ΔkvhA3. 建構HedB和YfdX的表現系統並純化HedB和YfdX：-免疫兔子取得YfdX多株抗體；以活體外系統分析顯示HedB和YfdX重組蛋白具有伴隨蛋白（chpaerone）活性，而YfdX活性明顯較HedB強。4. 利用LacZ報告系統分析發現hdeDB、hdeB1和yfdX在弱酸、靜置培養下的啟動子活性較高；在靜置或震盪培養下，RcsB和KvhA正向調控AFI基因，而Fur和PhoP只在震盪培養下正向調控AFI基因，另外，rpoS基因缺損會提高hdeDB的表現。5. 西方墨點法分析顯示YfdX在弱酸靜置培養下表現量最大，此時，RcsB和KvhA基因缺損明顯降低其表現，另外在缺鐵情況下，YfdX表現量大幅降低。
探討RcsB在克雷白氏肺炎桿菌CG43中調控抗酸逆境的反應
(2012)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系（所）
在克雷白氏肺炎桿菌具有厚重莢膜的臨床分離株CG43中，我們發現rcsB基因缺損不僅降低其莢膜生成量也降低了此菌在酸逆境（pH 3-M9培養基）的存活率，而此缺失可被轉殖入一表現rcsB基因的質體所彌補，此暗示RcsB扮演調控酸性逆境反應的角色。經由已定序的CG43基因體中搜尋同源序列，我們發現六個可能被RcsB調控的抗酸基因：其中，yfdX、hdeDB以及hdeB1基因座落於可能的適酸小島(acid fitness island)；此外，以二維蛋白質電泳比較分析以酸處理（pH 4.4-LB一小時）的CG43S3與CG43S3ΔrcsB蛋白體，分離出一個因rcsB缺損而不表現的蛋白點，經串聯質譜分析後鑑定為YfdX蛋白。為了更深入探討RcsB基因在調控抗酸逆境反應的角色，近一年的工作如下:1. 已建構ΔhdeB、ΔhdeD、ΔhdeB1、ΔhdeDB、ΔhdeBΔhdeB1、ΔhdeDBΔhdeB1、ΔhdeDΔyfdX、ΔhdeDBΔyfdX、ΔhdeDBΔhdeDΔhdeB1、ΔrcsBΔyfdX和ΔkvhAΔyfdX基因缺損株。2. 經由酸逆境存活率分析確認AFI基因均參與抗酸反應，而各基因缺損影響為ΔhdeB1＞ΔhdeD＞Δ yfdX＞ΔhdeB；ΔrcsB＞ΔyfdX＞ΔkvhA3. 建構HedB和YfdX的表現系統並純化HedB和YfdX：-免疫兔子取得YfdX多株抗體；以活體外系統分析顯示HedB和YfdX重組蛋白具有伴隨蛋白（chpaerone）活性，而YfdX活性明顯較HedB強。4. 利用LacZ報告系統分析發現hdeDB、hdeB1和yfdX在弱酸、靜置培養下的啟動子活性較高；在靜置或震盪培養下，RcsB和KvhA正向調控AFI基因，而Fur和PhoP只在震盪培養下正向調控AFI基因，另外，rpoS基因缺損會提高hdeDB的表現。5. 西方墨點法分析顯示YfdX在弱酸靜置培養下表現量最大，此時，RcsB和KvhA基因缺損明顯降低其表現，另外在缺鐵情況下，YfdX表現量大幅降低。
探討RcsB在克雷白氏肺炎桿菌CG43中調控抗酸逆境的反應
(2013)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系（所）
在克雷白氏肺炎桿菌具有厚重莢膜的臨床分離株CG43中，我們發現rcsB基因缺損不僅降低其莢膜生成量也降低了此菌在酸逆境（pH 3-M9培養基）的存活率，而此缺失可被轉殖入一表現rcsB基因的質體所彌補，此暗示RcsB扮演調控酸性逆境反應的角色。經由已定序的CG43基因體中搜尋同源序列，我們發現六個可能被RcsB調控的抗酸基因：其中，yfdX、hdeDB以及hdeB1基因座落於可能的適酸小島(acid fitness island)；此外，以二維蛋白質電泳比較分析以酸處理（pH 4.4-LB一小時）的CG43S3與CG43S3ΔrcsB蛋白體，分離出一個因rcsB缺損而不表現的蛋白點，經串聯質譜分析後鑑定為YfdX蛋白。為了更深入探討RcsB基因在調控抗酸逆境反應的角色，近一年的工作如下:1. 已建構ΔhdeB、ΔhdeD、ΔhdeB1、ΔhdeDB、ΔhdeBΔhdeB1、ΔhdeDBΔhdeB1、ΔhdeDΔyfdX、ΔhdeDBΔyfdX、ΔhdeDBΔhdeDΔhdeB1、ΔrcsBΔyfdX和ΔkvhAΔyfdX基因缺損株。2. 經由酸逆境存活率分析確認AFI基因均參與抗酸反應，而各基因缺損影響為ΔhdeB1＞ΔhdeD＞Δ yfdX＞ΔhdeB；ΔrcsB＞ΔyfdX＞ΔkvhA3. 建構HedB和YfdX的表現系統並純化HedB和YfdX：-免疫兔子取得YfdX多株抗體；以活體外系統分析顯示HedB和YfdX重組蛋白具有伴隨蛋白（chpaerone）活性，而YfdX活性明顯較HedB強。4. 利用LacZ報告系統分析發現hdeDB、hdeB1和yfdX在弱酸、靜置培養下的啟動子活性較高；在靜置或震盪培養下，RcsB和KvhA正向調控AFI基因，而Fur和PhoP只在震盪培養下正向調控AFI基因，另外，rpoS基因缺損會提高hdeDB的表現。5. 西方墨點法分析顯示YfdX在弱酸靜置培養下表現量最大，此時，RcsB和KvhA基因缺損明顯降低其表現，另外在缺鐵情況下，YfdX表現量大幅降低。
探討克雷白氏肺炎桿菌CG43二級訊息分子c-di-GMP 的調控網路
(2014)
彭慧玲
;
PENG HWEI-LING
;
國立交通大學生物科技學系（所）