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Browsing by Author "Yaw-KuenLi"

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    β-葡萄醣甘酵素之催化反應機構與應用之研究
    (1995)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    國立交通大學應用化學研究所
    4-苯基咪唑(4-Phenylimidazole)是至目前為止被 發現是.beta.-葡萄糖□酵素最強之抑制劑,它與 酵素之結合能為-8kcal/mol,然而由抑制作用之研 究發現其結合能約為苯分子和咪唑分子與酵素 之結合力的總和.換言之,將苯基與咪唑基鍵結 而成單一分子,所減少的亂度並未表現在其與 酵素結合上,簡單的解釋是酵素與4-苯基咪唑之 結合並非最佳構形,因而酵素必須消耗能量改 變其分子構形以與4-苯基咪唑結合.因此,若在苯基與咪唑基間置入一到數個亞甲基(Methylene) 可能可大大提升其與酵素之結合力.一系列這 類抑制劑將被合成並測試其抑制作用.最具抑 制作用者及4-苯基咪唑將被鍵結在聚合物上,以 製成親和性管柱之充填物,以利.beta.-葡萄糖□ 酵素之純化.此外,其他糖□水解酵素如.beta.-木 糖□酵素,及不同來源之葡萄糖□酵素均亦將 被純化,並進行其催化功能之比較與反應機構 的研究.親和性管柱之製備除可簡化繁瑣之分 離步驟外,亦可用以大量分離各種來源之.beta.- 葡萄糖□酵素,以利用其他相關領域之研究與 應用.本年度之工作:(1)親和性管柱之製備測試 與改進;(2)不同來源之.beta.-葡萄糖□酵素與.beta.-木糖□酵素之純化;(3).beta.-葡萄糖□酵素 與.beta.-木糖□酵素之反應機構研究.
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    人類 Alpha-L-岩藻醣甘酵素之結構與催化機構的研究(I)
    (2005)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    交通大學應用化學系
    人類α-L-巖藻糖..(α-L-fucosidase，簡稱hAFU)，可分解L-巖藻糖多 醣體、醣蛋白、醣脂類等。缺乏此酵素會引起巖藻糖累積症(Fucosidosis)而 逐漸導致神經傳導疾病。hAFU 在許多轉移性癌症中，活性有明顯升高的 現象，臨床上已被用來作為檢驗肝癌的標定物，和胎兒球蛋白(AFP)聯合偵 測可將肝癌診斷準確率提升至93%以上。諸多研究亦顯示此酵素之活性變 化與多種癌症手術後復發率有密切關係。此外，巖藻醣甘酵素被發現亦存 在於精液中和精子之漿膜上(plasma membrane)，可能與精卵之結合有關， 這些都顯示巖藻醣甘酵素在生理上可能扮演著相當重要的角色。目前對人 類巖藻醣甘酵素研究仍相當有限，可能的原因之一是其原始酵素(Native) enzyme)不易取得，又活性穩定的重組酵素表現和純化不易。本研究室已於 兩年前對此酵素進行先期研究並克服了表現該酵素的困難。此外在受質的 合成上亦突破了1,2-cis 之醣甘類的合成瓶頸，已可有效多量合成相關反應 受質甚或抑制劑以供本研究使用。 巖藻醣甘酵素屬於第29 家族醣類水解酵素(family GH29)成員，此族酵 素目前唯一的蛋白質晶體結構為Thermotoga maritime(細菌)的酵素，雖同屬 family29 但其催化性質和胺基酸相似度均與人類酵素差異頗大，預判蛋白質 結構亦會不同，由於它與人類疾病的緊密關係和對受孕的可能影響，使得 對此酵素的基礎研究更具意義。 本計畫為期兩年，將對此人類酵素之蛋白質結構進行模擬和晶體結構解 析，並依胺基酸比對以定點突變技術研究其重要殘基，利用活性位置抑制 劑標示法結合質譜之勝.定序技術以鑑定此酵素之親核性和一般酸/鹼胺基 酸的確切位置。藉由動力學研究和酵素抑製作用以深入探討酵素之催化機 構，進而達成有效的藥物設計。有效的抑制劑藥物可用以發展化學chaperone 治療法、高特異性之α-L-巖藻糖..檢測、親和性分離基材等。 二年內待完成的工作分列如下： 第一年: (1) 反應受質之合成 (2) 酵素純化與性質研究 (3) 突變酵素與活性分析 (4) 酵素動力學研究與反應機構 第二年: (1)親和抑制劑之合成 (2)酵素動力學研究與反應機構 (3)酵素結構模擬與晶體結構 (4)質譜之勝.定序與重要殘基鑑定
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    以動力學和基因定點突變研究黃質菌β-葡萄糖酵素之催化機構
    (1999)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    交通大學應用化學系
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    以定向演化研究β-葡萄糖甘酵素之活性區及其非自然演化之β-糖甘類酵素
    (2000)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    交通大學應用化學系
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    以酵素基因工程重建幾丁質酵素之產物特異性---基因選植與分解酵素之催化研究(I)
    (2000)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    國立交通大學應用化學系
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    挑戰聚醣胺水解酵素之自然設計(I)
    (2002)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    交通大學應用化學系
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    挑戰聚醣胺水解酵素之自然設計(II)
    (2003)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    國立交通大學應用化學系
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    挑戰聚醣胺水解酵素之自然設計(III)
    (2004)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    交通大學應用化學系
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    特殊Beta-1,3-葡萄五醣生產脢之反應機構研究與其應用之開發(I)
    (2003)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    國立交通大學應用化學系
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    特殊Beta-1,3-葡萄五醣生產脢之反應機構研究與其應用之開發(II)
    (2004)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    交通大學應用化學系
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    特殊Beta-1,3-葡萄五醣生產脢之反應機構研究與其應用之開發(III)
    (2005)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    交通大學應用化學系
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    醣類水解酵素之性質研究與應用之開發
    (1997)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    交通大學應用化學系
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    醣類水解酵素之性質研究與應用之開發
    (1996)
    李耀坤
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    Yaw-KuenLi
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    國立交通大學應用化學系