透過結構模擬與蛋白質工程重組幾丁聚醣水解酵素之研究

Abstract

本研究是先對Bacillus circulans MH-K1幾丁聚醣水解酵素做出結構模擬，再針對我們所選定的模擬結構在基因的T185後以AQPPKPS胺基酸片段取代掉原本的FYN片段，希望能改變其催化型態；之後將其建構在本實驗室之前所建立的CBP V5載體，使其在大腸桿菌JM109宿主細胞中表現。經過純化後可得約90%均質度的蛋白質。 我們對此重組蛋白質做了基本的特性研究，並將其結果與野生株相比較，發現雖然在二級結構上兩者十分相似，對溫度的反應活性亦相近，但是野生株酵素的水解產物以幾丁二醣，幾丁三醣為主要，此重組酵素的水解產物卻是以幾丁一醣、幾丁二醣、幾丁三醣所組成的混合物，顯示經過突變後，其活化中心的催化型態有所改變，未來可對結構模擬再做改進，繼續朝蛋白質工程方向改造酵素。