重組犬類濾泡刺激素之生產純化及活性分析

Abstract

截至目前為止，雌犬的生育調控尚未完全明確。與一般動物比起來，犬隻的生殖生理有許多獨特的地方，這包括卵排出後到輸卵管等待精蟲授精，所排出的卵尚未成熟，直到配種的精蟲鑽入才會成熟，隨後再發育成受精卵，再到子宮懷孕；排卵前黃體(LH)高峰會促使卵巢細胞轉化而分泌助孕素(progesterone)；助孕素可維持子宮穩定，使得以順利懷孕到分娩為止；懷孕與非懷孕雌犬體內的助孕素濃度極為相似等。而在內分泌系統中，濾泡刺激素(FSH)與目標細胞上的受體結合後，促使睪丸與卵巢發揮其功能，因此FSH對於哺乳動物的性徵與生殖生理扮演著極其重要的角色。 本研究的目的為試圖利用哺乳動物細胞表現系統，生產並純化重組的犬類濾泡刺激素(rcFSH)。首先將cFSHA 和cFSHB兩段cDNA，利用基因選殖技術選殖到哺乳動物的表現載體中，然後轉染到CHO與NS0細胞中表現。應用酵素免疫吸附及西方墨點法分析細胞內表現的重組犬類濾泡刺激素(rcFSH)。進一步與CHO細胞上表現的受體結合，利用酵素免疫分析(EIA)鑑定重組犬類濾泡刺激素在體外的生物活性，並與人類腦下垂體分離的濾泡刺激素做比較。實驗證明，此單鏈重組方法和細胞株所生產的犬類濾泡刺激素確實具有活性，可提供未來相關實驗與臨床利用。