Full metadata record
DC Field | Value | Language |
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dc.contributor.author | 傅耕彥 | en_US |
dc.contributor.author | 陳重元 | en_US |
dc.date.accessioned | 2014-12-12T01:46:52Z | - |
dc.date.available | 2014-12-12T01:46:52Z | - |
dc.date.issued | 2006 | en_US |
dc.identifier.uri | http://140.113.39.130/cdrfb3/record/nctu/#GT008719805 | en_US |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/11536/46890 | - |
dc.description.abstract | 本研究利用逆轉錄-聚合連鎖反應(RT-PCR)及cDNA末端快速擴增技術(RACE)從苦花(Varicorhinus barbatulus)肝臟選殖並定序出三條雌性激素受體基因全長,並送至Genbank/EMBL資料庫註冊,分別命名為vbER□(AJ547632)、vbER□1(AJ314603)、vbER□2(AJ547633),經序列比對(sequence alignment)及親源分析(phylogenetic tree)確定苦花ER與鯉形目(Cypriniformes) 的親源關係最親近,在演化上vbER□的C功能區(C domain)演化比其他鯉形目魚類慢,而其他功能區則演化較快。另外將vbER□及vbER□1基因全長剪接至pGAD424表現載體,且將三重複雌性激素反應序列(estrogen response element; ERE)剪接到□-半乳糖脢啟動子上,再轉殖到酵母菌中(YM4271),篩選具活性的菌種來偵測化合物的轉錄活化能力,藉由濃度反應關係圖,可以計算出化合物的配位體效力(ligand potency,或稱為EC50)及配位體效能(ligand efficiency),在11種測試物中,天然雌激素(17□-estradiol)及三種酚類衍生物即4-nonylphenol(4-NP)、4-t-optylphenol(4-t-OP)、bisphenol A(BPA)有明顯的濃度反應關係,以E2為標準進行常態化(normalize),可得四種化合物對vbER□轉殖酵母菌的相對效力(relative potency)及效能(relative efficiency)皆高於vbER□1轉殖酵母菌。而與人類或彩虹鱒ER轉殖酵母菌進行比較,本實驗建構之轉殖酵母菌更為敏感。另外4-NP及4-t-OP對兩種轉殖酵母菌的相對效力相差1.4~2.6倍,但BPA卻有12.8倍的差異,故存在受測物之選擇性,結果顯示建構的重組酵母菌可作為類雌激素的體外篩選實驗。本研究亦利用特定引子(primer)搭配RT-PCR反應來獲得各雌性激素受體在苦花組織的基因表現,結果vbER□與vbER□1在肝臟的表現量最高,而vbER□2則在腸表現量最高。本研究證明以PCR進行基因選殖是可行的,此外親緣關係及分子結構分析亦符合其他魚類ER相關的演化推論及蛋白質功能。 | zh_TW |
dc.language.iso | zh_TW | en_US |
dc.subject | 苦花 | zh_TW |
dc.subject | 雌性激素受體 | zh_TW |
dc.subject | 酵母菌 | zh_TW |
dc.subject | 轉錄活化 | zh_TW |
dc.subject | 逆轉錄-聚合連鎖反應 | zh_TW |
dc.subject | 親源分析 | zh_TW |
dc.subject | estrogen receptor | en_US |
dc.subject | Varicorhinus barbatulus | en_US |
dc.subject | RT-PCR | en_US |
dc.subject | RACE | en_US |
dc.subject | recombinant yeast | en_US |
dc.subject | transactivaton | en_US |
dc.title | 台灣本土性魚類(苦花)雌性激素受體基因選殖與環境荷爾蒙干擾效應研究 | zh_TW |
dc.title | Gene cloning for three ER cDNAs from the indigenous fish (Varicorhinus barbatulus) in Taiwan and the interfering effects by environmental hormones | en_US |
dc.type | Thesis | en_US |
dc.contributor.department | 環境工程系所 | zh_TW |
Appears in Collections: | Thesis |