奈米科技於醫學檢驗之應用：發展快速單一步驟免疫層析法檢測蝦白斑病毒之研究

Abstract

白斑病毒 (White Spot Syndrome Virus, WSSV) 是目前危害養殖蝦類之主要病原體。1992年於台灣首度被鑑別，其分布範圍不僅在亞洲，而是全世界。此病症特徵在於甲殼、附屬物和組織內面有明顯白斑，傳播容易且致死率高，對產業經濟方面影響甚鉅。為了有效控制病毒散佈，偵測已被WSSV輕微感染之潛在帶原者是極為重要之研究。PCR是最為大眾採用之檢驗方式，敏感度高，但花費不貲且需專人操作。故發展更快速方便檢測病毒之技術是刻不容緩。 本實驗利用WSSV之抗體，經西方墨點法 (Western blot) 和聚合酵素鏈擴增反應 (PCR) 確認，證實此抗體會辨識白斑病毒。將血清中免疫球蛋白G (IgG) 以高效能液相層析 (HPLC) 陰離子交換樹脂 (DEAE column) 分離純化，與實驗合成之奈米金顆粒 (gold nanoparticles) 相結合形成免疫金膠(immunogold)，應用於快速單一步驟之免疫層析法(immunochromatographic assay)。以白斑病毒蝦組織萃取液當作正控制組。此技術十分敏感，可特異性偵測在肌肉、足、內臟及甲殼中之白斑病毒。相反地，偵測病毒蝦組織時，未免疫血清中免疫球蛋白G (non-immuned IgG)不會產生偽陽性結果。使用本實驗發展出的免疫金膠技術，不僅加快檢驗速度，且不需操作試藥及儀器，適合蝦農於池邊檢測，第一時間發現並採取處理，避免災情擴大。