機械壓縮對軟骨細胞在三度空間多孔性支架上之基質合成影響

Abstract

近年來組織工程技術已被應用於關節軟骨組織之修復。然而在體外培養的組織工程軟骨時，由於與體內環境不同將面臨組織去分化(de-differienation)的問題，造成所培養的組織與體內組織在功能及品質上之歧異。關節軟骨在體內實際的環境，是不斷的經歷循環負載而發生週期性的變形和回復，循環負載及提供必要養份是軟骨細胞執行正常功能和維持胞外基質正常表現的重要因素。 本研究的目的，主要為建立一套循環灌流培養結合壓縮刺激的生物反應器，將軟骨細胞應用在組織工程支架的培養。在實驗中，將成豬後肢關節軟骨組織經酵素分解，分離軟骨細胞，再將107細胞種植入以聚乳酸-聚乙醇酸共聚物Poly -DL-latic-co-glycolic acid (PLGA)製做的多孔隙支架中，分別以靜置培養、動態灌流培養及動態壓縮刺激培養再生組織的比較。實驗組方面，將含有定量軟骨細胞的支架施予0.1 Hz ，10 %單軸變形量及流量8 ml/min的灌流培養，透過物理性刺激來探究軟骨細胞在應力刺激下之生長的情形。另一組則是動態灌流培養，其培養條件與實驗組相同，但不施予循環壓縮變形。控制組則是將含有定量細胞的支架靜置於T 75培養皿培養。經過三週的培養，由細胞數定量的結果，發現無應力刺激之灌流培養其細胞增生倍率可達2倍，而動態壓縮刺激培養之實驗組則為1.6倍，反觀靜置培養幾乎無增生。而基質分泌GAG情形，則是動態壓縮刺激的表現較好，而灌流培養次之，靜置培養較差。另依據H&E染色、第Ⅰ和Ⅱ型膠原蛋白染色及Safranin O染色結果觀察，經壓縮刺激培養後，其軟骨細胞維持原來型態，且形成之類軟骨組織類似於天然軟骨組織。灌流培養雖細胞密度高，但其基質分佈較為鬆散，而靜置培養其細胞量及基質合成表現都不佳。