吲哚生物鹼氧化與偶合生合成酵素之異體表現探討

Abstract

天然物K252a有抑制腫瘤細胞生長的生物活性，亦具有抑制神經生長因子誘導之小鼠視紫質PC12細胞(rat pheochromocytoma PC12 cells)過度生長及抗細胞凋亡之生物活性，實為一深具抗癌藥性之天然物。含醣吲哚生物鹼天然物在化學結構上基本上可包含吲哚生物鹼(Indolocarbazole Alkaloid)環狀結構與新穎醣基結構。本 (邱顯泰 博士)實驗室先前已在奴卡氏菌中選殖出包含吲哚生物鹼(Indolocarbazole Alkaloid)生合成基因群組的染色體DNA片段並已得其序列資訊。由本實驗室已有的研究發現奴卡氏菌中參與生合成吲哚生物鹼環狀結構的生合成途徑基因依序計有nokA、nokB、nokC與nokD四個。本研究即在於建構nokA與nokB兩個氧化與偶合基因的蛋白質表現質體，並在大腸桿菌中嘗試表現與純化其蛋白質，以期探討其在吲哚生物鹼核心環結構生合成中扮演的角色。本論文利用分子選殖及定向蛋白質誘導大量表現NokA，並進行酵素活性測試，以探討 NokA的左旋式氨基酸氧化酶活性。另外，該吲哚生物鹼生合成途徑的第二個酵素NokB亦被建構於大腸桿菌表現質體中，目前亦得可溶且純化的蛋白質，將來可持續進行其生化功能的研究。