利用單株抗體探討人類Haptoglobin之化學結構及免疫特性

Abstract

Haptoglobin (Hp) 在人體中有三種不同的型態，分別是Hp 1-1，Hp 2-1以及Hp 2-2。其中Hp 2-1以及Hp 2-2個體之alpha-2鏈 (142個胺基酸) 相對於alpha-1鏈 (83個胺基酸) 多了一段重複性序列 (從胺基酸12到70)，故在alpha-2鏈上亦多了一個SH group，因此可藉由雙硫鍵的形成而分別連接成線形的Hp 2-1聚合物與圓圈形的Hp 2-2聚合物。為了解三種型態Hp之免疫特性與其結構的關係，我們以Hp 2-1或Hp 2-2為抗原製作出之專一性抗體來闡示。單株抗體3H8其抗原決定位經由peptide array證實位於alpha鏈之胺基酸31至39 (RYQCKNYYK)，利用細菌表現之alpha-1及alpha-2重組蛋白亦可證實此抗體對alpha-2之反應較強，然而對於三種型態Hp之免疫反應卻幾近相同，可能導因於Hp 2-1及2-2之聚合物結構使得胺基酸31至39區域無法完全曝露。此外此抗體以競爭型酵素免疫連結分析法 (competitive-ELISA) 對三種型態Hp之免疫反應亦幾乎相同，故利用此抗體，即能有效快速地於人類血漿之Hp定量。另一方面，我們以Hp 2-1及2-2為抗原製作出之單株抗體，大多數僅能辨識雙硫鍵結未被破壞之Hp，且無法辨認以還原劑如beta-mercaptoethanol分離之alpha鏈或beta鏈，可能是由於Hp 2-1及2-2具有複雜程度較高之聚合物結構，而形成獨特的抗原決定位。這些單株抗體(conformational-dependent mAbs)中，我們發現有兩株（3B7與4H11）對於Hp 1-1之免疫反應明顯比Hp 2-1及2-2弱．於人類血漿中亦可區分Hp 1-1與另外兩種具有聚合物之Hp型態，只要再結合專一辨識Hp 1-1之單株抗體．即可快速區分不同型態之Hp。