標題: 利用單株抗體探討人類Haptoglobin之化學結構及免疫特性
Solution properties of human plasma haptoglobin as probed by monoclonal antibodies
作者: 殷韶禪
Shao Chen Yin
毛仁淡
Dr. Simon JT Mao
分子醫學與生物工程研究所
關鍵字: 單株抗體;抗原決定基;免疫反應;Haptoglobin;monoclonal antibody;antigenic mapping;immunoreactivity;site-directed mutagenesis;epitope
公開日期: 2004
摘要: Haptoglobin (Hp) 在人體中有三種不同的型態,分別是Hp 1-1,Hp 2-1以及Hp 2-2。其中Hp 2-1以及Hp 2-2個體之alpha-2鏈 (142個胺基酸) 相對於alpha-1鏈 (83個胺基酸) 多了一段重複性序列 (從胺基酸12到70),故在alpha-2鏈上亦多了一個SH group,因此可藉由雙硫鍵的形成而分別連接成線形的Hp 2-1聚合物與圓圈形的Hp 2-2聚合物。為了解三種型態Hp之免疫特性與其結構的關係,我們以Hp 2-1或Hp 2-2為抗原製作出之專一性抗體來闡示。單株抗體3H8其抗原決定位經由peptide array證實位於alpha鏈之胺基酸31至39 (RYQCKNYYK),利用細菌表現之alpha-1及alpha-2重組蛋白亦可證實此抗體對alpha-2之反應較強,然而對於三種型態Hp之免疫反應卻幾近相同,可能導因於Hp 2-1及2-2之聚合物結構使得胺基酸31至39區域無法完全曝露。此外此抗體以競爭型酵素免疫連結分析法 (competitive-ELISA) 對三種型態Hp之免疫反應亦幾乎相同,故利用此抗體,即能有效快速地於人類血漿之Hp定量。另一方面,我們以Hp 2-1及2-2為抗原製作出之單株抗體,大多數僅能辨識雙硫鍵結未被破壞之Hp,且無法辨認以還原劑如beta-mercaptoethanol分離之alpha鏈或beta鏈,可能是由於Hp 2-1及2-2具有複雜程度較高之聚合物結構,而形成獨特的抗原決定位。這些單株抗體(conformational-dependent mAbs)中,我們發現有兩株(3B7與4H11)對於Hp 1-1之免疫反應明顯比Hp 2-1及2-2弱.於人類血漿中亦可區分Hp 1-1與另外兩種具有聚合物之Hp型態,只要再結合專一辨識Hp 1-1之單株抗體.即可快速區分不同型態之Hp。
URI: http://140.113.39.130/cdrfb3/record/nctu/#GT009229512
http://hdl.handle.net/11536/76967
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