牛乳中Beta-Lactoglobulin之生理功能(I)

Abstract

β -Lactoglobulin (LG)是牛乳主要蛋白之一，含量約10％，分子量約18.5kDa，LG 為lipocalin 成員之一，二級結構上由9 個β-sheet 及1 個 α-helix 所組成。中心為疏水 性結構 (calyx)，可結合Vit A、Vit D、脂肪酸及固醇類。不似α-lactalbumin 可耐熱， LG 是牛乳中主要熱敏感蛋白，在加熱70-80 ℃之間其二級結構開始改變。過去三年 半研究中，我們定義出LG 變性之溫度及時間，可提供業者乳品加工之依據 (Chen et al, 2005, JDS) (1)。同時定位出LG 加熱變性之區域，此區域於加熱80℃以上即改變結構， 使其喪失結合疏水性分子之功能(Song et al, 2004, JBC) (2)。此外我們已發表只可辨識 還原乳而不辨識生乳之單株抗體 (Chen et al, 2004, JDS) (3)。反之，製作只辨識native LG 之單株抗體相當重要，將其用於偵測加工後鮮乳內尚未變性之LG。 然而LG 生理上功能至今尚未清楚，唯獨在In vivo 方面證明有降低膽固醇之功 能，但加熱後LG 對於降低膽固醇之影響尚未被證明出，本計畫欲證明LG 降低膽固 醇之機制，更深入探討LG 結構改變是否喪失降低膽固醇之功能。近來我們證明LG 具有刺激hybridoma B cell 增生，將利用LG 調控細胞生長或可廣泛應用於藥物、營養 及食品工業。因此本計畫兩年目標如下： 主要目標： 1. 利用單株抗體為標定物分析LG 熱敏感區域及與其生理功能之相關性 (第一年)。 2. 製作只專一性辨認native LG 之單株抗體，並用於偵測加工後牛乳中native LG 之 含量。(第一年)。 3. 探討加熱前LG 與加熱後LG 對降低膽固醇之影響(第一年及第二年)。 4. 研究LG 刺激hybridoma B cell 增生之機制，並純化LG 之receptor 及與receptor 結合之區域。(第一年及第二年)。 過去三年半我們非常努力，由於篩選抗體、生理實驗及純化receptor 所需之時間 較長，我們提出兩年之計畫，誠懇希望獲得支持。