全基因體化分析克雷白氏肺炎桿菌CG43的雙分子調控系統

Abstract

許多臨床分離的克雷白氏肺炎菌株具有高度的抗藥活性，近年來更 因抵抗廣效性β-lactam 抗生素的克雷白氏肺炎菌株急遽增加，限制了臨床可 用藥物的效益。為了尋找新的抑菌標的，我們在此提出一個針對高毒性克 雷白氏肺炎菌株CG43 的全基因體研究分析，目的在建立訊息感應蛋白 （sensor）和調控蛋白（response regulator）雙分子調控系統在此菌體內的 溝通網路，而在未來三年特定的計畫目標如下： 一、 在克雷白氏肺炎菌株CG43 中分離所有經序列比對被註解為雙 分子調控系統可能的調控子（promoter），同時建立這些調控 子的報告系統，藉分析LacZ 酵素活性來量度各個調控子的活 性並找出各個雙分子調控系統可能的訊息。 二、 藉cross-over PCR 系統化的建立全基因體的調控蛋白突變 株，並分析這些突變株的表現型。 三、 在克雷白氏肺炎菌株CG43 中大量表現這些調控蛋白，並偵測 各個具有過量調控蛋白的突變菌株表現。 四、 分析各個調控子在上述建構的突變株中的活性變化，藉此活 性變化反應來推斷各個雙分子調控系統可能的交互作用。 五、 藉報告調控子活性系統來尋找可受調控蛋白突變影響的標的 基因。 六、 藉二維電泳分析比較克雷白氏肺炎菌株CG43 與調控蛋白突變 的蛋白體，尋找受此調控蛋白調控的標的蛋白。