Purification and Characterization of β-Glucosidase from Flavobacterium meningosepticum

Abstract

本研究自Flavobacterium meningosepticum的細胞中純化出一種β-glucosidase (EC 3.2.1.21) ，其純化流程與性質尚未被研究過。細胞粗提取液經適當的硫酸銨分段沈 澱及二次陽離子交換樹脂管柱層析後，可得到95% 以上純度的β-glucosidase，其分 子量經凝膠體管柱層析鑑定為150kDa，是一雙聚體分子。 在可測量的範圍內，最適合的pH值約為5.0 ，活性最佳的溫度為50℃。在低於37℃， pH值介於5.0~8.0 之間酵素有較佳的穩定度。 金屬離子、EDTA及氯化鈉濃度對酵素活性的影響均十分有限。對p-nitrophenyl β-D -glucopyranoside的Km值為0.65±0.04mM，對2,4-dinitrophenyl β-D- glucopyranoside 的Km值則為0.28±0.02mM。此酵素對於受質糖基部分的選擇性甚嚴 ，須為β構型的葡萄糖基才可被分解。 以甜杏仁β-glucosidase的有效抑制劑－咪唑(imidazole) 類化合物對此作抑制性測 試，發現抑制效果不如甜杏仁β-glucosidase。而一般β-glucosidase的抑制劑，如 glucose 及δ-gluconolactone 對此酵素則具有抑制效果，其中glucose 的Ki約為 500 ±0.18mM，δ-gluconolactone 的Ki約為1.22±0.02mM。 由imidazole 對此酵素的抑制實驗顯示：imidazole 對此酵素為非競爭性抑制劑，此 結果與甜杏仁的β-glucosidase不相同。