研究幽門螺旋桿菌抑制宿主免疫反應之新基因對樹狀細胞及巨噬細胞之影響

Abstract

幽門螺旋桿菌的長期慢性感染是嚴重消化性潰瘍病症的主因，研究顯示幽門螺旋桿菌可由於其基因產物而造成宿主免疫抑制，進而可長期存在人體中造成慢性感染，依實驗結果發現幽門螺旋桿菌可以一尚未被發現之基因產物有效誘發宿主組織產生高量TGF-beta，藉此得以全面性抑制宿主的免疫作用。本實驗室目前已有效建立TGF-beta inducing substrate (TIS) 蛋白質功能測試的平台。將H. pylori sonicate 與AGS cell共同培養16小時，不論是野生種標準菌 (ACTT43504) 或臨床菌 (HC28)，均發現可誘發AGS cell產生TGF-β，其他菌種則不能誘發AGS cell產生TGF-β。AGS cell被誘發產生TGF-β的量亦隨著H. pylori感染的量而增加，接著以cagA, VacA, babA 或 sabA等多種基因缺失菌株之sonicate與AGS cell共同培養，仍可發現AGS cell被誘發產生大量TGF-β，顯示能誘發AGS cell產生TGF-β之蛋白質，應是另一未知之蛋白質。初步的資料將40到100kDa的H. pylori蛋白質與AGS cell共同培養16小時，發現得以誘發AGS cells產生TGF-β，而落於此分子量區間之外的H. pylori protein，則無此誘發AGS cells產生TGF-β的能力。收集此區間之蛋白質，利用膠體過濾法 (gel filtration )，以LC column依蛋白質分子量大小分離出分子量大小不一之蛋白質。將分離出的蛋白質，每管取25μL，每5管混合成一管與AGS cell共同培養16小時，發現所收集到的蛋白質中某些蛋白質具有誘發AGS cells產生TGF-β的能力。將這些收集到的蛋白質進行SDS-PAGE電泳，發現在70kDa左右有2條明顯的band，以in gel digestion回收蛋白質，將蛋白質樣品以質譜儀進行蛋白質身份鑑定。藉MALDI-TOF MS分析後，經蛋白質比對網站 比對，可得到2種TGF-β inducing substance (TIS) candidates，UreB及Hsp60。而於今年度計畫中，本研究室預計將利用基因選殖的方式生產大量的TIS，並藉以探求TIS對宿主天然免疫細胞的影響機制。是以本年度計畫主要目的為 (1) 完成TIS基因之選殖及TIS蛋白質的大量表現，(2) 研究此基因及其產物對宿主樹狀細胞 (Dendritic cells, DCs) 與巨噬細胞 (macrophage) 免疫抑制能力的影響。