烘培酵母菌生化分析相關□的染料配位子分相萃取研究

Abstract

酵母菌為許多臨床生化用 的可靠來源，本實驗藉添加高鹽溶液及甲苯於烘培酵母菌 懸浮液中，於35℃下，控制最終pH在7.0 以下，經培育後，再加蒸餾水於處理過之酵 母菌中促使菌體自解，可快速地取得酵母菌細胞液。 將抽出之酵母細胞液經蒸餾水透析後，在7 ％葡萄聚糖500,000－5％PEG 6,000，25m M 硫酸鉀系統中，添加不同量之各種PEG-diaminoalkane-Procion 染料，用來對酵母 細胞液中之G6 PDH，MDH ，HK，6PGDH 作親和性分相萃取（Affinity partitioning ）。 於7 ％葡萄聚糖500,000－5 ％PEG 6,000，25mM硫酸鉀系統中，PEG 部份之12％為PE G 3•3-diaminodipropylamine-Procion red HE-3B 取代後，對32.1mg/ml 蛋白質濃 度之酵母細胞液，經兩次萃取，三次洗滌，可將G6PDH ，MDH ，HK ，6PGDH純度分別 提高10.6，6.4 ，2.2 ，2.9 倍，回收率各為81.7－101.6 ％，60－81.9％，20.7－ 53.6，28.3－42.3％。 本研究發展出之染料親和性分相萃取法，應可廣泛應用於相關□之大規模提取及純化 。