利用噬菌體胜肽庫篩選對牛肝氧化鯊烯酵素有專一性的胜肽序列

Abstract

氧化鯊烯環化酵素（OSC）在固醇類和三萜類產物的生合成中，扮演重要的角色，可以催化受質鯊烯或者氧化鯊烯進行環化/重組反應，轉變成多環結構的羊毛硬脂醇及環阿屯醇。由於氧化鯊烯環化酵素催化的複雜產物膽固醇及麥角脂醇是構成細胞膜的重要要素，且在細胞生長過程中產生此酵素，所以氧化鯊烯環化酵素作為目標物設計抗菌劑及降低膽固醇藥物是相當重要的課題。我們對於篩選氧化鯊烯環化酵素有親合力作用的胜肽序列感到興趣，希望未來發展成為藥物。用兩種噬菌體胜肽庫，七個及十二個隨機胜肽的胜肽庫，對氧化鯊烯環化酵素進行配位基的篩選。將噬菌體胜肽庫和覆蓋滿目標物的盤子反應，洗去為鍵結的噬菌體，並且將有鍵結的噬菌體洗滌下來，依照這樣的過程進行五次對氧化鯊烯環化酵素的親和篩選，得到具有鍵結力的噬菌體胜肽序列，並且進行DNA定序，得到八個對氧化鯊烯環化酵素具有親和性的噬菌體胜肽序列，由西方墨點法測定得到1個七胜肽序列和6個十二胜肽序列具有反應。結果中，其中1個表現十二胜肽序列的樣品在點墨法中清楚看到反應，但在ELISA測試中反應較弱，利用西方墨點法測試時，卻沒有反應。